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O caso começou numa exploração de produção de leitões em pequena escala na Estiria, no sudeste da Áustria, que relatou maiores perdas de leitões de tremoes congénitos (CT) em Janeiro de 2015. Os animais desta exploraçãoforam examinados e foram recolhidas amostras. Os leitões afectados pela TC mostraram tremores laterais severos e muitas vezes eram incapazes de sugar leite, o que levava a elevação da taxa de mortalidade pré-desmame. A prevalência de TC variou de 20% a 100% nas ninhadas afetadas. Os exames patológicos foram realizados confirmando a presença de lesões típicas de CT A-II.
Foram testadas várias amostras da exploração utilizando uma PCR de transcrição reversa baseada em sonda de TaqMan específica de pestivírus (APPV) com coeficiente de PCR específico (RT-PCR), mas obtiveram-se resultados negativos. No entanto, obteve-se um amplicão de comprimento apropriado a partir de amostras de soro de CT utilizando uma nova RT-PCR de panpestivírus (PPF 5'-GTKATHCAATACCCTGARGC-3 'e PPR 5'-GGRTTCCAGGARTACATCA-3'), que permite a detecção de CSFV, BVDV -1, BVDV-2, BDV, BV e APPV. Surpreendentemente, a sequenciação deste produto RT-PCR produziu uma sequência desconhecida com um quadro de leitura aberto ininterrupto. Uma busca BLAST inicial resultou em "nenhuma semelhança significativa encontrada", mas a sequência traduzida de 270 aa alinha bem com diferentes pestivírus. O ARN viral foi detectado em todas as amostras (soro, amígdalas, pulmão, fígado, baço e material do sistema nervoso central) de leitões afetados por CT e seus companheiros da exploração.
Após a inoculação de células SK-6 com amostras de soro de leitões afectados, foi detectada a amplificação deste pestivírus desconhecido usando RT-PCR. Foi designado, provisoriamente, de agente "Linda" (agente neurodegenerativo indutor de agitação lateral) para evitar confusão com outros pestivírus. Determinou-se o genoma completo do vírus Linda (LV) e o comprimento do genoma do LV. Foi realizada uma análise filogenética de LV demonstrando a divergência do LV de outros pestivírus. Descobriu-se que a identidade entre LV, pestivírus aprovados e APPV era apenas 60%, mas descobriu-se uma identidade de 68% entre LV e BV. A comparação das sequências de poliproteína pestiviral produziu uma identidade de aminoácidos de 69% entre LV e BV e de <54% com todos os outros pestivírus.
Conclusões
Um agente pestiviral anteriormente desconhecido foi encontrado em leitões afetados pela TC numa exploração na Áustria. Foi observada uma hipomelinação grave em toda a substância branca da medula espinal e foi detectado o antigénio pestivírus no cérebro dos leitões afetados pela TC, sugerindo uma relação causal entre infecção e lesões. As análises do genoma montado permitiram uma atribuição inequívoca de LV dentro do género Pestivirus em relação à presença de genes específicos de pestivírus (Npro e Erns) e homologia de sequência a outros pestivírus. Em contraste com os pestivírus suínos atípicos (APPV), que dificilmente infecta células cultivadas, o LV pode ser facilmente propagado em linhas celulares suínas sem a necessidade de adaptação, semelhante ao que foi relatado para BV. Sugere-se que o LV provavelmente compartilhe um antepassado comum com a BV.
Após sua descrição ≈10 anos atrás, a BV foi buscada intensamente em todo o mundo, mas o vírus nunca foi detectado fora da Austrália. O extenso cultivo da célula celular de BV levou à hipótese de que o vírus recentemente pulou de outra espécie para hospedeiros suínos. A descoberta de um pestivirus relacionado com divergência de sequência substancial em suínos num continente diferente sugere que ambos os vírus provavelmente têm uma origem suína. A identificação do anticorpo monoclonal 6A5 específico para E2 de reacção cruzada indica que existe uma proteína cruzada de proteína pestiviral relacionada, o que pode interferir com os testes sorológicos para CSFV. São necessários mais trabalhos para investigar a prevalência e a epidemiologia do VE na Europa e avaliar sua virulência em experiências com animais controlados.
Lamp B, Schwarz L, Högler S, Riedel C, Sinn L, Rebel-Bauder B, et al. Novel Pestivirus Species in Pigs, Austria, 2015. Emerg Infect Dis. 2017;23(7):1176-1179. https://dx.doi.org/10.3201/eid2307.170163
