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A produção de suínos geneticamente modificados tem um grande impacto graças às suas aplicações na investigação básica, biomedicina e produção de carne. A clonagem foi a primeira técnica utilizada para este fim, embora tenham sido desenvolvidos outros métodos mais fáceis e baratos, tais como a microinjecção, electroporação ou lipofecção de oócitos e zigotos. Neste estudo, foi analisada a produção de embriões geneticamente modificados por lipofecção de oócitos com zona pelúcida intacta utilizando LipofectaminaTM CRISPRMAXTM Cas9, em comparação com o método de electroporação. Foram avaliados dois factores: o aumento da concentração de complexos lipofectamina-ribonucleoproteína (LRNPC) (5% vs. 10%) e a concentração de ribonucleoproteína dentro dos complexos (1xRNP vs. 2xRNP).
Observou-se que o aumento da concentração de LRNPC teve um efeito prejudicial sobre o desenvolvimento embrionário e um efeito subsequente sobre o número de embriões mutantes. O grupo dos 5% tinha uma taxa de blastocistos mutantes semelhante ao método de electroporação (5,52% e 6,38%, respectivamente). O aumento da concentração de ribonucleoproteína dentro dos complexos não teve qualquer efeito sobre o blastocisto e taxa de mutação, sendo a taxa de blastocistos mutantes semelhante nos grupos de lipofecção 1xRNP e 2xRNP e no grupo de electroporação (1,75%, 3,60% e 3,57%, respectivamente).
Em conclusão, demonstramos que é possível produzir embriões knock-out por lipofecção de oócitos suínos com zona pelúcida intacta com eficiências semelhantes às da electroporação, embora seja necessária uma maior optimização, principalmente em termos da utilização de vesículas mais eficientes para o encapsulamento com diferentes composições.
Piñeiro-Silva C, Navarro-Serna S, Belda-Pérez R, Gadea J. Production of Genetically Modified Porcine Embryos via Lipofection of Zona-Pellucida-Intact Oocytes Using the CRISPR/Cas9 System. Animals. 2023; 13(3):342. https://doi.org/10.3390/ani13030342
