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A pré-selecção do sexo da descendência mediante o uso de espermatozóides portadores do cromossoma X ou do Y separados por citometria de fluxo é, hoje em dia, uma realidade.No entanto, enquanto o sémen separado está disponível comercialmente em bovino, em outras espécies domésticas, incluindo a espécie suína, a técnica está ainda a nível experimental. A finalidade principal desta tese foi desenvolver um protocolo para a aplicação eficiente dos espermatozóides de varrasco separados mediante citometria de fluxo.
Para isso, foram desenvolvidos os seguintes estudos:
- No primeiro estudo, foi avaliada a capacidade dos espermatozóides procedentes de ejaculados de diferentes varrascos para resistir ao procedimento de separação espermática. Para isso, ejaculados de varrasco foram submetidos a diferentes tratamentos: conservação em estado líquido, congelação standart, separação espermática mediante citometria de fluxo e separação e congelação. Os parâmetros avaliados foram: motilidade, viabilidade, oxidação lipídica da membrana plasmática e fragmentação do ADN.
- O segundo estudo teve como objectivo a optimização dos protocolos para a criopreservação dos espermatozóides separados de varrasco. Para isso foram avaliados os efeitos da congelação standart (3% glicerol) sobre as características in vitro dos espermatozóides separados e congelados a uma baixa concentração espermática, assim como os efeitos de diferentes concentrações de glicerol sobre a qualidade espermática dos espermatozóides separados e congelados a baixas concentrações.
- O objectivo do terceiro estudo foi desenhar um protocolo adequado para a manipulação dos espermatozóides de varrasco durante e depois do processo de separação com a finalidade de obter espermatozóides separados com uma óptima capacidade fecundante. Para este propósito, diferentes aspectos da separação espermática foram avaliados. Foi avaliado o efeito da alta diluição, o meio de colheita usado e a composição do fluido circulante sobre a qualidade (motilidade e viabilidade) e a funcionalidade (capacidade fecundante in vitro) de espermatozóides separados.
- O objectivo do quarto estudo foi desenvolver um procedimento útil de inseminação laparoscópica utilizando um número muuito baixo de espermatozóides separados por citometria de fluxo que permita obter óptimos resultados de fertilidade a nível de exploração. Foi avaliado o efeito de uma inseminação laparoscópica simples (ovidutos) e dupla (ovidutos e cornos uterinos) com espermatozóides separados, sobre os parâmetros reprodutivos das porcas inseminadas.
Após os resultados destes estudos, podemos concluir que:
Existe uma variabilidade individual entre varrascos relativamente à sua capacidade para resistir ao processo de separação espermática por citometria de fluxo. Além disso, a resposta dos espermatozóides de um varrasco a uma determinada biotecnologia espermática não prevê a resposta dos mesmos a outros procedimentos. A congelação espermatozóides a baixas concentrações em combinação com o uso de concentrações finais de glicerol de 0.5–1% pode ser um método apropriado para a criopreservação de espermatozóides de varrasco separados por citometria de fluxo. A adição de EDTA no fluído envolvente e de gema de ovo no meio de recolha melhora a capacidade fecundante in vitro dos espermatozóides de varrasco separados e ambos os agentes devem ser incluídos como componentes essenciais nos meios utilizados nos procedimentos de separação espermática por citometria de fluxo em suínos. O procedimento de inseminação laparoscópica descrito no presente estudo é um método eficiente e aplicável em condições de exploração para a obtenção de descendência do sexo desejado em gado suíno. O protocolo de dupla inseminação laparoscópica, usando entre 3 e 6 milhões de espermatozóides separados por porca permite obter parâmetros reprodutivos adequados a nível de exploração, fazendo com que a tecnologia de separação espermática por citometria de fluxo seja potencialmente aplicável em núcleos de selecção genética em gado suíno.
del Olmo Llanos, David. Selección del sexo en el ganado porcino : análisis de factores limitantes y desarrollo de estrategias eficientes. URI: http://hdl.handle.net/10201/41209
