Diagnóstico laboratorial: Disenteria suína (Brachyspira hyodysenteriae)

Exames disponíveis:

Cultura bacteriana

• Isolamento de organismos vivos.
• Tipo de amostra: fezes.
• Vantagens:
  • Relativamente pouco dispendioso.
  • A presença de Brachyspira spp. fortemente beta-hemolítica está associada à virulência.

Tabela 1: Relação entre a beta-hemólise na Brachyspira spp. e a doença

• Contras:
  • Menos sensível do que o teste PCR.
  • Crescimento lento (até 10 dias).
  • Requer cultura anaeróbia.
  • Algumas estirpes menos virulentas podem ser encontradas em explorações sem sinais clínicos ou lesões.

Susceptibilidade antimicrobiana

• Exame in vitro: capacidade de um organismo vivo crescer sob concentrações específicas de diferentes antimicrobianos.
• Tipo de amostra: fezes.
• Prós:
  • Identificação da susceptibilidade ou resistência a estirpes específicas a agentes antimicrobianos comuns.
• Contras:
  • Requer um isolado bacteriano.
  • Os testes in vitro podem diferir ligeiramente dos resultados in vivo.
  • Alguns antimicrobianos específicos podem não ser incluídos ou podem exigir testes especiais separados.
  • Custo moderado.
  • Os resultados demoram 7 dias.

Histopatologia

• Avalia a presença de lesões nos tecidos que podem confirmar a presença de doença.
• Tipo de amostra: tecidos.
• Prós:
  • As lesões histopatológicas podem ser altamente sugestivas se forem encontradas muitas espiroquetas perto de lesões intestinais.
  • Pode detectar formas ligeiras da doença.
• Contras:
  • É necessária a fixação em formol dos tecidos intestinais de um animal recentemente morto.
  • As lesões são semelhantes às de outras doenças.

Esfregaços de impressão

• Detecta a presença de bactérias.
• Tipos de amostras: tecido do intestino grosso, fezes.
• Prós:
  • Fácil de executar.
  • Coloração não específica.
  • Microscopia de campo escuro.
  • O diagnóstico provisório pode ser feito através da detecção de um grande número de espiroquetas.

    • 

    • Pode identificar quantidades baixas, moderadas ou altas de bactérias presentes.
• Contras:
  • Exige a presença de um número significativamente maior de bactérias do que a cultura ou a PCR.
  • Não avalia a capacidade hemolítica dos isolados e, por conseguinte, não distingue entre estirpes não patogénicas, colite espiroqueta e disenteria suína.

Reacção em cadeia da polimerase (PCR)

• Detecta a presença de uma sequência específica de ácido nucleico (ADN) bacteriano.
• Tipos de amostras: tecido intestinal, esfregaços fecais, fezes.
• Vantagens:
  • Elevada sensibilidade.
  • A quantificação da PCR está associada à presença de lesões.
  • Custo moderado.
  • As amostras de fezes ou de tecido podem frequentemente ser combinadas para reduzir os custos e minimizar a perda de sensibilidade (especialmente no que respeita à relevância clínica).
• Contras:
  • Alta sensibilidade – confirma a presença de bactéria mas não de doença.
  • São necessários primers adequados para detectar e diferenciar entre Brachyspira spp.

Ensaio por imunoabsorção ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipo de amostra: soro.
• Prós:
  • Pode detetar a infecção ao nível da exploração agrícola.
  • Os anticorpos podem durar vários meses.
  • Os níveis de IgG no soro estão correlacionados com a duração dos sinais clínicos.
• Contras:
  • Os testes não estão imediatamente disponíveis.
  • Baixa sensibilidade e especificidade.
  • Utilizados para a detecção a nível da exploração e não para o diagnóstico individual do animal.
  • Os anticorpos específicos e o momento da detecção podem variar ligeiramente entre os kits disponíveis no mercado.
  • Muitas vezes, os antigénios utilizados podem ser específicos de determinadas espécies de Brachyspira.
  • Não existe correlação entre os níveis de anticorpos e a protecção.
  • Desconhece-se a protecção cruzada entre Brachyspira spp.

Interpretação de resultados:

Cultura bacteriana

• Positivo: presença de bactérias.
  • Beta-hemólise forte - disenteria suína.
  • Beta-hemólise fraca - colite por espiroquetas ou não patogénica.
• Negativo: Negativo, o animal pode ter sido previamente tratado com antibióticos ou ter sido tratado demasiado tarde na infecção.

Susceptibilidade antimicrobiana

• Susceptível: possível boa escolha para tratamento se o antimicrobiano conseguir atingir o tecido-alvo.
• Resistente: deve ser selecionado um antimicrobiano diferente.
  CIM: se for efectuada a CIM (concentração inibitória mínima), certifique-se de que o antimicrobiano seleccionado atinge o valor de CIM indicado no órgão-alvo.

Histopatologia

• Positivo: A presença de espiroquetas junto das lesões constitui um diagnóstico presumível.
• Negativo: Não há lesões intestinais.

Esfregaço de impressão

• Número de espiroquetas presentes:
  • Elevado: altamente sugestivo de doença.
  • Moderado: interpretação variável.
  • Baixo: valor duvidoso (pode ser uma condição não patogénica ou crónica).
  • Não presente: animal possivelmente tratado anteriormente com antibióticos ou contribuinte não significativo.

PCR

• Positivo: confirma a presença de bactéria.
• Negativo: Negativo ou infecção muito antiga para detectar a bactéria ou animal tratado previamente com antibióticos.

ELISA

• Positivo: Exposición anterior (>2-4 semanas) a vacina ou bactéria de campo.
• Negativo:
  • Negativo a vacina ou bactéria de campo.
  • Infecção muito antiga para ser detectada.
  • O uso de antibióticos pode inibir o crescimento bacteriano e diminuir a resposta imunitária.

Cenários:

Porcos de engorda com diarreia (aguda)

• Recolher amostras fecais de 10 ou mais suínos com diarreia não tratados com antibióticos e submetê-las a cultura bacteriana e PCR em grupos de 5.
• Efetuar a necropsia de 1-3 suínos mortos recentemente ou eutanasiar os suínos com diarreia. Avaliar macroscopicamente o intestino grosso (especialmente o ceco e o cólon espiral) e fixá-lo em formalina para histopatologia.

Antecedentes crónicos de diagnóstico de disenteria suína mas sem sinais clínicos observados

• Recolher amostras de fezes de 4-6 parques e enviar para PCR.
  • Recolher amostras de 15-20 suínos às 14 e 18 semanas de idade.
  • Duas abordagens à recolha:
    • Transversal - recolha de amostras de diferentes grupos etários ao mesmo tempo (obtém resultados mais rapidamente).
    • Longitudinal - recolha dos mesmos suínos ao longo do tempo (resultados mais exactos).
  • Análise de amostras de soro por ELISA.