Diagnóstico laboratorial: Rotavírus

Existem três grupos principais de rotavírus que causam diarreia nos suínos: Rotavírus A, Rotavírus B e Rotavírus C. Cada grupo de vírus é diferente dos outros e requer testes específicos concebidos para eles. A diarreia nos suínos envolve frequentemente infecções com vários grupos de rotavírus ao mesmo tempo.

Testes disponíveis

Patologia macroscópica

• Avalia a presença de estreitamento da parede do intestino delgado que pode sugerir a presença de doença.
• Localização das lesões: jejuno e íleo.
• Prós:
  • Resultados rápidos e com boa relação custo-benefício.
  • Aplicável aos três grupos de rotavírus.
• Contras:
  • Não diagnóstico - podem ser encontradas lesões semelhantes noutras doenças, especialmente em infecções por coronavírus (gastroenterite transmissível, diarreia epidémica porcina e delta-coronavírus porcino).
  • Requer tecidos frescos (<15 min), uma vez que a decomposição altera drasticamente o aspeto do intestino delgado
  • Não distingue os diferentes grupos de rotavírus

• Avalia a presença de lesões tecidulares (atrofia das vilosidades no intestino delgado) que podem sugerir fortemente a presença de doença.
• Tipos de amostras: tecido do jejuno e do íleo.
• Prós:
  • Confirma a atrofia das vilosidades sugestiva de enterite viral.
• Contras:
  • É necessária a fixação dos tecidos intestinais com formalina nos 15 minutos seguintes à morte do animal. O tecido intestinal decompõe-se rapidamente.

Imunohistoquímica (IHC)

• Detecta a presença de antigénio viral.
• Tipos de amostras: tecido do jejuno e do íleo.
• Prós:
  • Diagnóstico definitivo: pode confirmar a presença do vírus com lesões associadas.
• Contras:
  • Actualmente apenas disponível para o Rotavírus A e o Rotavírus C (não disponível para o Rotavírus B).

Reacção em cadeia da polimerase (PCR)

• Detecta a presença de uma sequência específica de ácido nucleico (ARN) viral.
• Tipos de amostras: tecidos intestinais do jejuno e do íleo, esfregaços fecais, fezes.
• Prós:
  • A PCR multiplex pode detectar diferentes grupos de rotavírus, incluindo o rotavírus A, o rotavírus B e o rotavírus C.
  • Elevada sensibilidade.
  • Quantificação por PCR
  • Custo moderado
  • As amostras de fezes ou de tecidos podem frequentemente ser agrupadas para reduzir o custo e minimizar a perda de sensibilidade (especialmente para relevância clínica).
• Contras
  • Sensibilidade elevada - pode confirmar a presença do vírus mas não a doença (elevada prevalência do vírus no ambiente).

Isolamento do vírus

• Isolar o vírus vivo.
• Tipos de amostras: tecidos intestinais do jejuno e do íleo, esfregaços fecais, fezes.
• Prós:
  • Isolamento do vírus para utilização no desenvolvimento de vacinas (vacinas autógenas).
• Contras:
  • Caro
  • Resultados lentos
  • Apenas disponível actualmente para o rotavírus A e não para o rotavírus B ou o rotavírus C
  • Frequentemente difícil de cultivar (muitos falsos negativos)
  • O manuseamento das amostras do campo para o laboratório pode afectar a sobrevivência do vírus

Ensaio por imunoabsorção ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipos de amostras: soro.
• Prós:
  • Os animais permanecem positivos durante várias semanas
  • Pode identificar explorações negativas
• Contras:
  • A elevada prevalência do vírus no ambiente resulta numa exposição comum em muitos/quase todos os suínos.
  • Exige um teste específico para cada grupo de rotavírus
  • Não há protecção cruzada entre diferentes grupos de rotavírus

Tabela 1. Resumo dos testes aplicáveis relativamente aos diferentes grupos de rotavírus.

Interpretação de resultados

Patologia macroscópica

• Positivo: Confirmação preliminar da presença de estreitamento intestinal.
• Negativo: Os casos precoces ou ligeiros podem não manifestar lesões intestinais extensas.

Histopatologia

• Positivo: Confirmação da doença, mas não da causa da doença.
• Negativo: Negativo ou as lesões não são detectadas se o teste for incorrecto ou muito tempo após a infecção.

IHC

• Positivo: O vírus está presente no local da lesão.
• Negativo: Negativo ou o vírus não é detectado se o teste for realizado muito tempo após a infecção ou se a concentração do vírus for demasiado baixa (apenas presente durante um curto período de tempo).

PCR

• Positivo: Confirmação da presença dos diferentes grupos de rotavírus (A, B e C).
• Negativo: Negativo, o vírus não é detectado se o teste for realizado muito tempo após a infecção ou devido a uma selecção ou manuseamento incorrectos da amostra.

Isolamento do vírus

• Positivo: Confirmação da presença do vírus, mas sem doença.
• Negativo: Negativo, o vírus não é detectado se o teste for efectuado muito tempo após a infecção ou simplesmente não pode crescer devido a outra contaminação ou manuseamento incorreto (presente mas muito difícil de cultivar). Não detecta o rotavírus B ou o rotavírus C.

ELISA

• Positivo: Exposição prévia (> 2-4 semanas) à vacina ou ao vírus selvagem.
  • Não há associação entre positividade e doença.
• Negativo:
  • Negativo à vacina ou ao vírus selvagem.
  • Infeção demasiado recente para ser detectada

Cenários

Leitões recém-nascidos com diarreia (aguda ou crónica)

• Recolha de amostras fecais de 10 ou mais leitões não tratados com diarreia e testes PCR para detecção do rotavírus A, rotavírus B e rotavírus C em grupos de 5.
• Necropsia de 1-3 leitões mortos recentemente ou eutanásia de leitões com diarreia. Avaliar macroscopicamente o jejuno e o íleo para detectar o estreitamento da parede intestinal. Recolher espécimes e fibriná-los em formalina para histopatologia e IHC.

Leitões recém desmamados com diarreia (aguda ou crónica)

• Recolha de amostras fecais de 10 ou mais leitões não tratados com diarreia e testes PCR para detecção do rotavírus A, rotavírus B e rotavírus C em grupos de 5.
• Necropsia de 1-3 leitões mortos recentemente ou eutanásia de leitões com diarreia. Avaliar macroscopicamente o jejuno e o íleo para detectar o estreitamento da parede intestinal. Recolher espécimes e fibriná-los em formalina para histopatologia e IHC.