Entendendo melhor a gripe suína: Diagnóstico (1/3)

As infecções pelo vírus da gripe A (IAV) representam um grande desafio tanto na investigação como na prática a nível mundial, não só em porcas, mas também em leitões e porcos de engorda. Actualmente, os vírus da gripe são endémicos em muitas explorações suinícolas, com um quadro clínico altamente variável e um diagnóstico que é muitas vezes complicado por co-infecções. Em muitos casos, a identificação do vírus da gripe envolvido na doença requer a detecção do agente patogénico para além do grupo etário clinicamente afectado. A dinâmica crescente na evolução genética dos vírus da gripe e a variação da sua infecciosidade e expressão da doença requer experiência e conhecimentos para interpretar os resultados do diagnóstico. Neste primeiro de três artigos consecutivos, vamos concentrar-nos nas últimas notícias sobre o vírus e a sua abordagem diagnóstica. Na segunda parte detalharemos a doença clínica e as co-infecções e no terceiro artigo daremos uma visão geral das estratégias de controlo.

Os vírus da gripe A (IAV) em porcos são vírus RNA envolvidos, pertencentes à família Orthomyxoviridae. Uma das suas características é que o seu genoma é constituído por oito segmentos de genes, cada um dos quais codifica pelo menos uma proteína. Dois dos oito segmentos são responsáveis pelas estruturas antigénicas de superfície conhecidas como hemaglutinina (HA) e neuraminidase (NA) (figura 1). Os IAV são classificados em subtipos de acordo com estas estruturas e, até à data, foram identificados dezoito subtipos de HA e onze subtipos de NA.

Até 2009 circulavam principalmente três subtipos em suínos (swIAV), H1avN1, H1huN2 e H3huN2. Nessa altura, apenas alguns genótipos distintos, definidos por todos os segmentos do genoma, tinham sido identificados. Este cenário mudou com a chegada da estirpe pandémica H1pdmN1pdm durante a pandemia de gripe de 2009. Dados publicados recentemente (Henritzi et al. 2020) mostram que existem agora 31 genótipos swIAV distintos resultantes da reordenação genética dos oito segmentos entre H1pdmN1pdm e as anteriores linhagens swIAV que circulam na Europa. Esta vigilância passiva foi conduzida em 2.457 explorações em 17 países europeus entre 2015 e 2017. Revelou que o swIAV pode ser detectado nas explorações ao longo do ano, pelo que, ao contrário da gripe humana, não é sazonal. Foram encontradas diferenças na distribuição de subtipos em diferentes regiões.

Estão disponíveis vários métodos de diagnóstico para a detecção directa da swIAV. O método e o número de amostras devem ser escolhidos de acordo com a situação da exploração. As zaragatoas nasais são adequados para a detecção de proteínas de matriz swIAV por PCR. Se positivo com uma carga viral adequada, a tipagem pode ser executada por RT-PCR específica para HA e NA. Deve notar-se que os animais geralmente só excretam o vírus durante 5-7 dias após a infecção e limpam o vírus dos pulmões em cerca de 9 dias. Por conseguinte, o momento da amostragem por métodos individuais (esfregaços nasais, broncoalveolares ou lavagem pulmonar) é essencial. Uma vez que o quadro clínico é frequentemente complicado por infecções secundárias, o swIAV pode já não ser detectável quando os sintomas mais graves ocorrem. No caso de infecções com vários subtipos swIAV, nem todos os subtipos envolvidos serão detectados igualmente. Especialmente em explorações com gripe endémica e sintomas clínicos pouco claros, recomenda-se a utilização de métodos de rastreio (amostras de esfregaço de úbere, amostras de líquido oral) em diferentes grupos etários.

Se cinco zaragatoas nasais forem analisadas numa "pool" por PCR, não há praticamente nenhuma perda de sensibilidade. Isto pode aumentar a taxa de detecção, porque com "pools" mais amostras podem ser processadas com o mesmo esforço. Por conseguinte, a zaragatoa nasal continua a ser crucial para o diagnóstico da gripe. A boa qualidade da amostra permite frequentemente a tipagem e a cultura. É importante que as amostras sejam enviadas refrigeradas para o laboratório por correio expresso. Num surto agudo, devem ser colhidas amostras de animais que tenham adoecido recentemente e apresentem febre. Nas explorações endemicamente infectadas, a selecção de animais para amostragem deve ser ajustada ao facto de os animais com sintomas típicos, tais como temperatura elevada, serem menos óbvios. A detecção viral precoce é muitas vezes possível em leitões em lactação sem sinais clínicos visíveis. Porque os anticorpos maternos protegem contra a doença, mas não contra a infecção, os leitões em lactação podem excretar a doença e transportá-la para a transição. A mistura de leitões permite uma propagação muito rápida do vírus, pelo que o período imediatamente após o desmame é um bom momento para a amostragem. Os animais nos grupos etários que mostram regularmente sinais clínicos (espirros, constipações, tosse, febre, atrasos súbitos) também devem ser amostrados. Por conseguinte, são indicados testes transversais, amostrando diferentes grupos etários ao mesmo tempo para obter a melhor visão geral das estirpes swIAV circulantes na exploração.

Por ser um método indirecto (detecção de anticorpos), um teste de inibição da hemaglutinação (HI) em amostras de soro de animais de preferência não vacinados pode indicar que estão envolvidos outros subtipos que não tenham sido detectados anteriormente directamente. O HI baseia-se no facto de os anticorpos inibirem o efeito de coagulação sanguínea do IAV. Se o soro de um porco pode impedir a coagulação do sangue pelas estirpes do vírus da gripe utilizadas no teste, isto indica que o porco desenvolveu anticorpos específicos para subtipos semelhantes. Portanto, o HI oferece uma vantagem sobre o ELISA, que só pode dar informações sobre a gripe A em geral. No entanto, amostras de soro de leitões até ao fim da transição muitas vezes não mostram a presença de anticorpos, mesmo que os animais tenham tido contacto com a swIAV na transição. A seroconversão pode ser dificultada por anticorpos maternos, que chegam aos leitões não só de porcas vacinadas mas também de porcas previamente infectadas. Portanto, a recolha de amostras de sangue em transição não é conclusiva, no entanto, as amostras de soro emparelhado de suínos de engorda, nulíparas ou porcas podem fornecer bons resultados.

Embora os diagnósticos sejam frequentemente muito trabalhosos, são a única forma de determinar as estirpes que circulam na exploração e o momento da infecção. São um pré-requisito para a implementação das medidas de gestão e protocolos de vacinação correctos.